组培材料:材料为白花龙成熟果实的种子,
组培方法
培养基及培养条件 MS培养基中蔗糖含量30.0 g/L,琼脂含量6.0 g/L,pH 5.8~6.0。1/2MS培养基中的大量元素减半,蔗糖含量30.0 g/L,琼脂含量6.0 g/L。培养基在105 Kpa、121℃条件下高压灭菌20 min。培养温度(25±1)℃,光照强度2000 lx,光照时间12 h/d。
种子萌发 脱去白花龙果实的果皮,将种子转至超净工作台,用75%酒精浸泡1 min,无菌水清洗1遍后剥开外种壳,放入0.1%升汞中浸泡5 min,无菌水清洗6~8遍。接种时以带胚乳和切除胚乳的种子为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度(0、1.0、2.0和3.0 mg/L)GA3进行种子萌发。每处理10瓶,每瓶接种3个外植体。接种45 d后统计种子的萌发率和成苗率,观察记录苗的生长状况。
继代培养 以MS为基本培养基,采用L9(3)正交试验设计(表1),分析6-BA、NAA和TDZ对白花龙无菌苗茎段增殖培养的影响。每处理10瓶,每瓶接种3个外植体。45 d后统计增殖系数和平均苗高,记录丛生芽的生长情况。
壮苗与生根 选取高于1.5 cm的白花龙丛生芽转接至MS+0.5 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3培养基上培养45 d以壮苗;选择壮苗培养后生长良好的幼苗,切成带两个节的茎段用于直接或间接生根培养。直接生根培养的培养基为MS或1/2MS添加不同浓度(0、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 mg/L)IBA;间接生根培养是先将茎段置于较高浓度(100.0、200.0和300.0 mg/L)IBA溶液中浸泡15 min,再转至MS或1/2MS空白培养基中进行培养。每处理6瓶,每瓶接种5个外植体。45 d后统计平均生根数,计算生根率,记录根的生长情况。
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