显微鉴别
茎横切面：呈类圆形，有4个较大棱脊凸起，表皮外壁微增厚，有锥形单细胞非腺毛。皮层外侧2-3列薄壁细胞较小，向内逐渐增大。中柱鞘纤维呈不连续环列，壁微木化。维管束双韧型；形成层成环；木质部导管群多为10余个并列成行，呈放射状；射线多为单列细胞。髓部大。
理化鉴别
薄层色谱：取本品粗粉5g，置索氏提取液中，加甲醇提取4h，滤过，蒸去甲醇，残渣加0.25mol/L硫酸溶液溶解，再用氢氧化钠溶液调pH至7.0，加氯仿后再调pH至11.0-12.0，析出生物碱用氯仿提取完全，水洗后，回收氯仿，甲醇定容5ml，作为供试液，另以蛇根碱甲醇溶液为对照品溶液。分别点样于同一氧化铝薄层板上，用丙酮-甲醇-醋酸（70：25：5）展开，置紫外光灯（365nm）下检视，供试液色谱中在与对照品溶液色谱的相应位置，显相同颜色的斑点。
化学成分
从长春花中已经分离得到的吲哚类生物碱有70余种，如长春碱，长春新碱，派利文碱，洛柯定碱，洛柯辛碱，去乙酰文朵尼定碱，长春花碱，长春尼定，洛柯宁碱，四氢蛇根碱，异长春碱，环氧长春碱，洛柯碱，四氢鸭脚木碱，西特斯日钦碱，二氢西特斯日钦碱，异西特斯日钦碱，去羟长春碱，长春米辛碱，卡擦任碱，长春尼辛，长春尼宁二氢氯化物，白饭树碱，洛柯绕文碱，派利米文碱，长春考灵，洛柯绕定碱，洛柯绕辛碱，长春尼定碱，长春尼宁，蛇根碱，留绕西文碱，绕维定碱，二氢长春尼宁，冠狗牙花定碱等。又含肌醇，琥珀酸，黄酮类化合物，断马钱子酸和四乙酰断马钱子甙。长春花胺，2’-羟基长春碱。根含生物碱：帽柱木碱，阿枯米辛碱，长春西定，洛柯文碱，硫酸卡文辛碱，硫酸留绕西文碱，阿模楷灵碱，派利卡灵碱，阿模绕生碱，硫酸派绕生，硫酸卡文西定碱，硫酸马安卓辛碱，硫酸卡生定碱，长春碱，δ－育亨宾，蛇根碱，鸭脚木碱，四氢鸭脚木碱。根皮含鸭脚木碱和蛇根碱。叶含生物碱，主要为长春多灵，长春尼宁，四氢鸭脚木碱；又含育亨宾，长春花碱，长春碱，长春新碱等。并含派利文碱。